You-gen.ru

Здоровье и медицина
0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Xpert® HIV-1 Viral Load

Согласно оценкам Всемирной организации здравоохранения, в конце 2019 г. в мире проживало 38 миллионов носителей ВИЧ. 1

На сегодняшний день измерение в плазме крови концентрации РНК ВИЧ-1 (известной как вирусная нагрузка ВИЧ) с использованием
молекулярно-биологических диагностических тестов, обнаруживающих вирус по его нуклеиновымкислотам, входит в стандарт лечения
ВИЧ-положительных пациентов и применяется для прогноза состояния пациента и оценки ответа на антиретровирусную терапию. Уровень вирусной нагрузки
— это важный параметр для оценки скорости развития заболевания и, отдельно либо в сочетании с определением количества CD4 Т-лимфоцитов, имеет высокую прогностическую ценность. 2-7

Потребность в быстром тесте на вирусную нагрузку ВИЧ, достаточно универсальном, чтобы удовлетворить любые требования как к производительности, так и к функции прямого доступа для обработки срочных образцов, является все более насущной, поскольку приоритетным становится индивидуальный подход к каждому пациенту, обеспечивающий лучшее качество лечения.

Вирусная нагрузка

Вирусная нагрузка показывает, сколько ВИЧ содержится в крови. Наряду с числом лимфоцитов CD4, вирусная нагрузка стала важнейшим косвенным показателем активности ВИЧ-инфекции (Hughes, 1997; Mellors, 1997; Lyles, 2000; Ghani, 2001). Она позволяет оценивать риск прогрессирования болезни и судить о необходимости антиретровирусной терапии а, кроме того, служит важнейшим критерием успеха лечения. Раньше с этой целью использовали другие косвенные показатели — p24, неоптерин или 2- микроглобулин. Сегодня эти методы устарели. Во время тестов на вирусную нагрузку определяют концентрацию вирусной РНК (генетического материала ВИЧ), которая в точности соответствует концентрации самого вируса. Единицей измерения служит число копий вирусной РНК в 1 мл (мл-1). Изменение вирусной нагрузки обозначают как N log10, где N — это степень, в которую возводится 10.

Вирусная нагрузка, мл -1log10
101,0
501,7
1002,0
5002,7
10003,0
10 0004,0
50 0004,7
100 0005,0
1 000 0006,0
Интерпретация

Чем больше вирусная нагрузка, тем выше риск сокращения числа лимфоцитов CD4 и, следовательно, прогрессирования ВИЧ-инфекции и возникновения СПИД-индикаторных заболеваний (Mellors, 1997; Lyles, 2000, Phillips, 2004). Высокой считается вирусная нагрузка свыше 100 000 мл -1 или 5,0 log10 (иногда даже выше 50 000 мл -1 ), низкой — ниже 10 000 мл -1 . Однако, это только ориентировочные значения. На состояние иммунной системы вирусная нагрузка влияет по-разному. У одних больных число лимфоцитов CD4 достаточно долго не меняется, несмотря на высокую вирусную нагрузку, а у других оно быстро сокращается даже при относительно невысокой вирусной нагрузке. По-видимому, вирусная нагрузка у женщин в целом ниже, чем у мужчин. По данным метаанализа, различие между мужчинами и женщинами составило 41% или 0,23 log10 (95% доверительный интервал 0,16–0,31 log10) (Napravnik, 2002).

Причины этих различий непонятны. Должны ли они учитываться при определении показаний к лечению, до сих пор не ясно.

Методы исследования

Сегодня используют три метода определения вирусной нагрузки: транскрипционную полимеразную цепную реакцию (ПЦР); метод разветвленной ДНК; метод программного НК-анализа (амплификация нуклеиновых кислот, NASBA). Они различаются как порогом чувствительности, так и диапазоном, в пределах которого данные надежны и воспроизводимы (табл. 11.1). Чтобы определить вирусную нагрузку любым из этих методов, имеющееся число копий вирусной РНК необходимо увеличить — амплифицировать. При ПЦР и программном НК-анализе вирусная РНК проходит несколько этапов ферментации, а затем амплифицируется до измеримого количества. Метод разветвленной ДНК не требует предварительно расщеплять вирусную РНК, при нем после соединения молекулы разветвленной ДНК с участками вирусной РНК происходит амплификация биологического сигнала.

Вариабельность результатов в пределах каждого из трех методов невелика, так что их данные можно считать воспроизводимыми, но при интерпретации результатов помнить о ней следует. Изменение вирусной нагрузки менее 0,5 log10 не считают значимым. К примеру, сокращение вирусной нагрузки с 4,3 log10 до 3,9 log10 (то есть с 20 000 до 8 000 мл-1) не всегда говорит о том, что она действительно сократилась. То же самое справедливо и для повышения показателя. Таким образом, часто ни о чем не говорят изменения вирусной нагрузки в целых 3 раза! Это очень важно объяснить пациентам, чтобы избавить их от необоснованных огорчений или радости после ознакомления с результатами анализов.

Между тремя методами определения вирусной нагрузки различия существенны (Coste, 1996), так что пользоваться то одним методом, то другим не следует. Обычно данные, полученные методом разветвленной ДНК, в 2 раза меньше, чем результаты ПЦР. Кроме того, методы отличаются чувствительностью к разным подтипам вируса (Parekh, 1999). Особого внимания требует обследование пациентов из Африки и Азии, где часто встречается ВИЧ не подтипа B — у них при первом обращении вирусная нагрузка часто оказывается неожиданно низкой. В таких случаях сменить метод исследования как раз необходимо. Новые диагностические наборы с усовершенствованными праймерами, вероятно, более чувствительны к редким подтипам ВИЧ. Каждый метод исследования обладает диапазоном чувствительности, результаты за пределами которого ненадежны. ПЦР существует в двух вариантах — обычном и сверхчувствительном. У сверхчувствительной ПЦР верхняя граница диапазона чувствительности — 75 000 мл -1 , так что этот метод следует использовать только при предположительно низкой вирусной нагрузке.

Важно следовать правилу: определять вирусную нагрузку всегда одним и тем же методом в одной и той же лаборатории! Лаборатория должна иметь опыт в проведении этих исследований и постоянно выполнять их в достаточном количестве. Анализ должен быть проведен как можно скорее после забора крови. Кроме того, в лаборатории должны правильно собирать и транспортировать центрифугированную плазму (все эти тонкости следует предварительно выяснить в самой лаборатории).

Таблица 11.1. Методы определения вирусной нагрузки. На каждом бланке с результатом исследования должны указываться сведения для врача: метод исследования, название и версия диагностического набора, диапазон и порог чувствительности

КомпанияRoche/AbbottBayer/ChironOrganon
МетодПЦРМетод разветвленной ДНКNuclisens, количественная проба на ВИЧ-1
Диапазон чувствительности400–750 000 мл -1 сверхчувствительный: 50– 75 000 мл -1100 000–500 000 мл -140–10 000 000 мл -1
СопоставимостьРезультат примерно в 2 раза выше получаемого методом разветвленной ДНК (диагностические наборы 2,0 и 3,0)Результат примерно в 2 раза ниже получаемого при ПЦР (диагностические наборы 2,0 и 3,0)Результат примерно соответствует результатам ПЦР
Преимущества методаЧастота ложноположительных результатов ниже, чем у метода разветвленной ДНКОдинаково чувствителен ко всем подтипам ВИЧ (A-G), относительно прост в исполненииОдинаково чувствителен ко всем подтипам ВИЧ (A-G), большой диапазон чувствительности
Читать еще:  У ребенка нет яичек
Факторы, влияющие на показатель

На величину вирусной нагрузки влияют не только особенности метода, но и множество других факторов. В частности, она меняется после вакцинации и на фоне сопутствующих инфекций. Особенно высокой вирусная нагрузка бывает при острой оппортунистической инфекции. По данным одного исследования, активный туберкулез способен повысить вирусную нагрузку в 5–160 раз (Goletti, 1996). Значительного повышения вирусной нагрузки можно ожидать и при сифилисе (Buchacz, 2004). В такое время определять ее нет смысла. После введения вакцины — против гриппа (O’Brien, 1995) или пневмококковой (Farber, 1996) — наблюдается преходящее повышение вирусной нагрузки (Kolber, 2002). Наиболее высокой она становится через 1–3 недели после вакцинации, поэтому контрольное исследование необходимо назначать не раньше, чем через 4 недели.

Следует отметить, что повышение вирусной нагрузки не всегда говорит о вирусологической неудаче лечения и лекарственной устойчивости. Так называемые скачки вирусной нагрузки (временные незначительные повышения) обычно проходят без последствий — это подтверждено многочисленными исследованиями последних лет (см. раздел «Цели и принципы лечения»). Кроме того, всегда следует помнить о том, что пробы крови могли быть перепутаны — людям свойственно ошибаться.

Динамика вирусной нагрузки на фоне ВААРТ

Определение вирусной нагрузки, введенное в практику в 1996–1997 годах, полностью изменило подходы к лечению ВИЧ-инфекции. Передовые исследования группы под руководством Дэвида Хо (David Ho) показали, как развивается ВИЧ-инфекция in vivo (Ho, 1995; Perelson, 1996). Изменение вирусной нагрузки на фоне антиретровирусной терапии чутко реагирует на репродукцию и элиминацию вируса в организме. Уже через две недели после начала ВААРТ концентрация ВИЧ-1 в плазме сокращается на 99% (Perelson, 1997). По данным одного крупного когортного исследования, через 4 недели лечения у 84% больных вирусная нагрузка стала ниже 1,000 мл-1. Сокращение вирусной нагрузки происходит в два этапа: в первые 3–6 недель чрезвычайно стремительно, а затем —на протяжении долгого времени — медленно (Wu, 1999).

Чем выше была вирусная нагрузка перед началом терапии, тем дольше она остается определимой. По данным одного исследования, вирусная нагрузка 1000 мл -1 падает до неопределимого уровня через 15 дней, а 1000 000 мл -1 — через 113 дней (Rizzardi, 2000). График на рис. 11.1 демонстрирует типичную двухэтапную динамику сокращения исходно высокой (в данном случае почти 4 000 000 мл -1 ) вирусной нагрузки.

Рисунок 11.1. Характерная двухэтапная динамика вирусной нагрузки на фоне ВААРТ. Исходно вирусная нагрузка была чрезвычайно высокой, ниже 50 мл-1 она стала лишь к 32-й неделе лечения. Обратите внимание на временный подъем вирусной нагрузки на 24-й неделе. Возможно, он обусловлен вариабельностью метода. Больной получал одну и ту же схему ВААРТ.

Рисунок 11.1. Характерная двухэтапная динамика вирусной нагрузки на фоне ВААРТ. Исходно вирусная нагрузка была чрезвычайно высокой, ниже 50 мл -1 она стала лишь к 32-й неделе лечения. Обратите внимание на временный подъем вирусной нагрузки на 24-й неделе. Возможно, он обусловлен вариабельностью метода. Больной получал одну и ту же схему ВААРТ.

Множество исследований пыталось установить, можно ли прогнозировать успех лечения в самом его начале (Demeter, 2001; Kitchen, 2001; Lepri, 2001; Thiabut, 2000). По данным исследования среди 124 пациентов, снижение вирусной нагрузки менее чем 0,72 log10 за первую неделю терапии послужило прогностическим фактором неудачи лечения у более 99% пациентов (Polis, 2001). Для клинической практики, однако, это вряд ли имеет значение — по нашему опыту, определять вирусную нагрузку в первые две недели после начала лечения бессмысленно.

Первые месяцы мы обычно определяем вирусную нагрузку раз в 4 недели до тех пор, пока она не станет неопределимой — в этом основная цель лечения! Затем исследование достаточно повторять раз в 3 месяца. При повторном повышении вирусной нагрузки исследования вновь необходимо проводить чаще. Через месяц после начала ВААРТ вирусная нагрузка должна стать меньше 5 000 мл -1 . Если этого не произошло, вероятность вирусологической неудачи лечения высока (Maggiolo, 2000).

Определять вирусную нагрузку не в крови и плазме, а в других биологических жидкостях (спинномозговой жидкости, влагалищном отделяемом, сперме) тоже можно — результаты вполне надежны. Тем не менее, такие исследования чаще проводят в научных целях, а на практике используют редко.

Интерпретация результатов исследования «Антитела к вирусу иммунодефицита человека 1,2 (ВИЧ 1,2) + антиген (Ag)»

Порядок проведения исследования на наличие антител к ВИЧ строго регламентирован приказами МЗ РФ и санитарными правилами СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ-инфекции» от 11.01.2011 г. и состоит из скринингового исследования на наличие антител методом иммуноферментного анализа (ИФА), разрешенным к использованию, и подтверждения результата методом иммуноблота, проводимого в лаборатории городского или Республиканского Центра СПИД.

Иследование антител к вирусу иммунодефицита следует проводить не ранее, чем через 2 недели после возможного заражения, и при наличии отрицательного результата повторить его через 3 и 6 недель. Возможно проводить анализ на ВИЧ анонимно (в данном случае результат исследования выдаётся с Ф.И.О. как «АНОНИМ»). Если исследование проводиться у известного пациента, то необходимо дополнительно указать номер документа удостоверяющего личность, дату выдачи, адрес регистрации.

Данное исследование предполагает одновременное качественное определение антигена р24 ВИЧ и антител к ВИЧ типов 1 и 2. Антитела к ВИЧ могут обнаруживаться со второй недели после инфицирования, их титр увеличивается в течение 2-4 недель и сохраняется в течение многих лет. У 90-95% инфицированных они обнаруживаются в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% — в период от 3 до 6 месяцев, у 0,5-1% — в более поздние сроки. После инфицирования ВИЧ, еще до сероконверсии в крови больного может быть выявлен антиген ВИЧ. В качестве маркера в тест-системах используемых в лаборатории определяется структурный ядерный белок ВИЧ р24, который появляется в крови через 2 недели после инфицирования и исчезает только через 2 месяца.

Данный подход в исследовании позволяет проводить самую раннюю диагностику ВИЧ — инфекции. Характеристика применяемых тест-систем: при определении антител чувствительность – 100%, специфичность более 99,5%; чувствительность при определении антигена р24 менее 18 пг/мл.

Положительный результат: Антитела к ВИЧ обнаружены. При обнаружении антител к ВИЧ при скрининговом иммуноферментном исследовании, в лаборатории, проводившей исследование, сыворотка пацинета дважды проверяется методами ИФА на тест-системах разных производителей, если определяется хотя бы один положительный результат, то сыворотка направляется на подтверждение методом иммуноблота в городской или Республиканский Центр СПИД. Необходимо заметить, что 100% специфичностью не обладают даже лучшие из представленных на рынке диагностических тест-систем, так как всегда существует вероятность получения ложноположительных результатов, связанных с особенностями сыворотки крови пациента. Поэтому если положительный результат не подтвердиться в иммуноблоте, результат пациента считается отрицательным. Тестирование необходимо подтвердить в динамике, если в иммуноблоте получен неопределенный результат. Рекомендуется проводить повторные обследования на СПИД (ВИЧ) через 2 — 3 недели. Положительный результат пациенту выдается, только при подтвержденном методом иммуноблота анализе, врачом в запечатанном конверте вместе с копией результата иммуноблота.

Читать еще:  Хруст в лопатках

Отрицательный результат: антитела к ВИЧ отсутствуют.

Исследование повторяется через две-три недели при получении сомнительного результата. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет ряд особенностей. С момента рождения до 15 месяцев в крови детей могут циркулировать материнские антитела класса Ig G к ВИЧ. Отсутствие антител к ВИЧ у новорожденных не означает, что вирус не проник через плацентарный барьер. В период 36 месяцев после рождения детей ВИЧ-инфицированных матерей необходимо обследовать лабораторными и клинико-дагностическими методами на наличие ВИЧ-инфекции. На основании лабораторных данных, других видов исследований и клинической картины диагноз ВИЧ-инфекции ставит врач инфекционист!

Лабораторная диагностика

Отдел общеклинических исследований и иммуноцитометрии

В этом подразделении проводятся общеклиническое исследование крови и мочи и оценка иммунного статуса.
Общий анализ мочи проводится с помощью автоматического анализатора CLINITEK 500 (Bayer HealtCare).
Исследование включает в себя:

  • оценка физических свойств мочи(цвета, прозрачности);
  • определение рН мочи;
  • определение удельного веса мочи;
  • полуколичественное определение содержания белка;
  • полуколичественное определение содержания глюкозы;
  • полуколичественное определение содержания билирубина;
  • полуколичественное определение содержания кетонов;
  • полуколичественное определение содержания нитритов;
  • полуколичественное определение содержания уробилиногена;
  • полуколичественное определение содержания эритроцитов;
  • полуколичественное определение содержания лейкоцитов.

Общий анализ крови полностью автоматизирован и проводится на гематологических анализаторах.
Для бесперебойной работы лаборатория оснащена двумя взаимозаменяемыми моделями производства фирмы Labix diagnoctics (Франция).
Анализатор АВХ Pentra 60 является полностью автоматизированным гематологическим анализатором для диагностики проб цельной крови in vitro. Он может работать в режиме СВС+5DIFF (подсчет клеток крови с дифференциацией лейкоцитарной формулы) и определяет 26 параметров анализа крови.
Анализатор АВХ MICROS 60-СТ/ОТ также является полностью автоматизированным гематологическим анализатором для диагностики in vitro, с использованием образцов цельной крови, тромбоцитарной массы и концентратов компонентов цельной крови. На анализаторе можно проводить измерение 18 параметров.
В сложных диагностических ситуациях проводится дополнительное исследование лейкоцитарной формулы врачом-специалистом. Микроскопия гематологического мазка осуществляется с помощью бинокулярных микроскопов (модель СХ21) фирмы OLYMPUS corporation (Япония).
Для стандартизации и избежания погрешностей при подготовке мазка крови к исследованию окраска препаратов выполняется на аппарате для окраски предметных стекол Hema — Tek (Bayer Diagnostics).
Измерение скорости оседания эритроцитов также проводится автоматизированно, на специальном анализаторе Ves matic 20 (Diesse Diagnostica Senese, Италия).
Особенностью методики, основанной на методе Вестергрена, является намного больший диапазон измерения по сравнению с устаревшим методом измерения СОЭ в капиллярах Панченкова, что делает возможным получение истинных значений СОЭ (до 200 мм/ч), без ложного занижения результата.
Таким образом, общеклинический анализ крови, проведенный в лаборатории, включает в себя следующие показатели (в 1 кубическом миллиметре крови):

  1. ПОКАЗАТЕЛИ КРАСНОЙ КРОВИ:
    • концентрация эритроцитов (RBC);
    • концентрация гемоглобина (HGB);
    • измерение гематокрита (HCT);
    • измерение среднего объема эритроцита (MCV);
    • среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH);
    • средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC);
    • ширина распределения эритроцитов (RDW).
  2. ИССЛЕДОВАНИЕ ТРОМБОЦИТОВ:
    • концентрация тромбоцитов (PLT);
    • измерение среднего объема тромбоцита (MPV);
    • расчет тромбокрита (РСТ).
  3. ПОКАЗАТЕЛИ БЕЛОЙ КРОВИ:
    • концентрация лейкоцитов (WBC);
    • дифференциация лейкоцитарной формулы;
    • с определением концентрации и расчетом процентного соотношения лимфоцитов (LYM), нейтрофилов (NEU), базофилов (BAS), эозинофилов (EOS), моноцитов (MON).
  4. Исследование РЕТИКУЛОЦИТОВ проводится врачом-специалистом при микроскопии.
  5. Измерение СКОРОСТИ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ).

Анализ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА проводится методом проточной иммуноцитофлуорометрии.
Это высокотехнологичное современное исследование с определением фенотипа отдельных клеточных популяций. Практически все этапы анализа автоматизированы.
Лаборатория оснащена оборудованием производства фирмы Bector Dickinson (США). Цитометры BD выгодно отличаются от моделей других фирм-производителей наличием функции автоматического гейтирования, что значительно повышает точность определения.
Предварительная пробоподготовка проводится на автоматическом модуле Sample Prep Assistant II.
Основной объем исследований делается на проточном цитометре FACS Calibur, дополнительно оснащенном модулем автоматической загрузки проб.
Данная модель цитометра позволяет определять широкую панель СД-маркеров и большой спектр показателей гуморального иммунитета.
В лаборатории востребовано определение СД-маркеров субпопуляций лимфоцитов (с подсчетом абсолютного количества и процентного соотношения клеток): СД 45 (лейкоциты), СДЗ (лимфоциты), СД4 (Т-хелперы), СД8 (Т-супрессоры), СД19 (В-лимфоциты) и СД16/56 (NK-клетки).
Для экспресс-исследований у ВИЧ-инфицированных пациентов (панель СД4/СД8) используется проточный цитометр FACS Count.
Для автоматизации и эргономизации мелких манипуляций и промежуточных этапов работы Отдел общеклинических исследований и иммуноцитометрии оснащен также достаточным количеством вспомогательного оборудования: вортексы, ротаторы-миксеры, электронные пипетки и электронные дозаторы-степперы (BRAND, Германия), центрифуги и холодильные шкафы.
Для контроля качества получаемых результатов проводится построение контрольных карт при определении количественных показателей (гемоглобин, СОЭ); отдел участвует в Федеральной Системе внешнейоценки качества лабораторных исследований и в Системе оценки качества исследований фирмы Becton Dickinson.

Биохимическая лаборатория

Лаборатория оснащена современным оборудованием для определения широкого спектра параметров клинической биохимии:

в лаборатории могут выполняться любые биохимические исследования, в том числе:

  1. исследование углеводного обмена:
    • определение уровня глюкозы в крови;
    • определение уровня гликозилированного гемоглобина;
  2. исследование функций внутренних органов:
    • уровень общего белка и альбумина
    • уровень общего билирубина и его фракций
    • уровень креатинина, мочевины
    • концентрация мочевой кислоты
  3. исследование активности ферментов:
    • аланинаминотрансферазы (АЛТ)
    • аспартатаминотрансферазы (АСТ)
    • гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТ)
    • креатинфосфокиназы (КФК)
    • лактатдегидрогеназы (ЛДГ)
    • щелочной фосфатазы (ЩФ)
  4. исследование активности блока ферментов для оценки функции поджелудочной железы:
    • амилазы общей
    • амилазы панкреатической
    • липазы
  5. липидограмма (оценка обмена жиров):
    • холестерин
    • липопротеиды высокой плотности (ЛПВП-холестерин)
    • липопротеиды низкой плотности (ЛПНП-холестерин)
    • липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП-холестерин)
    • триглицериды
    • расчет индекса атерогенности
  6. исследование уровня железа в сыворотке крови (диагностики анемии)
  7. исследование показателей минерального обмена:
    • концентрация калия
    • концентрация кальция
    • концентрация магния
    • концентрация фосфора
  8. исследование концентрации отдельных специфических белков количественное определение турбидиметрическим методом):
    • С-реактивный белок
    • антистрептолизин-о
    • ревматоидный фактор
    • иммуноглобулины классов А, М, G

Особое внимание уделяется качеству проводимых исследований, достоверности получаемых результатов, проводится построение контрольных карт для всех определяемых показателей. Результаты исследований оцениваются в Федеральной Системе внешней оценки качества (ФСВОК).

Отдел молекулярных методов исследования

В этом подразделении проводятся современные высокотехнологичные исследования для выявления и количественного определения генетического материала возбудителей различных инфекций.
В лаборатории представлены следующие виды молекулярных исследований: полимеразная цепная реакция (ПЦР), метод выявления разветвленной нуклеиновой кислоты и ДНК-сегментирование.
Постановка ПЦР полностью автоматизирована, детекция результатов проводится с помощью флуоресцентной метки в режиме реального времени (ПЦР-КТ). Для постановки ПЦР лаборатория оснащена автоматической станцией для выделения нуклеиновых кислот (I этап) Freedom evo (ТЕСАN, Швейцария) и несколькими амплификаторами (II и Ш этап) планшетного и роторного типа: Rotor-Cene Q (QIAGEN, Германия), DTprime 4 (ДНК-технология, РФ), m2000 rt (Abbott, США).

Читать еще:  Качаем плечи и спину

Методом ПЦР проводится:

Метод амплификации разветвтленной ДНК (РНК) представлен запатентованной технологией VERSANT фирмы SIEMENS. Это полуавтоматический (VERSANT 340) и полностью автоматизированный (VERSANT 440) комплексы для работы в микропланшетном формате с хемилюминисцентной детекцией результата. Метод применяется для качественного и количественного исследования «трех китов»: вируса иммунодефицита человека, вирусов гепатитов В и С.
Для выявления мутаций вируса иммунодефицита человека, от которых зависит устойчивость вируса к антиретровирусным препаратам в лаборатории проводится генотипирование ВИЧ-1 с помощью запатентованной системы TRUGENE фирмы SIEMENS (ДНК-секвенирование).
Для качественной и эффективной предварительной обработки и хранения исследуемых образцов лаборатория оснащена современным вспомогательным оборудованием: центрифуги с охлаждением (Hettich, Германия) для ультрацентрифугирования, морозильные шкафы для хранения образцов при -80 градусах (Snijders scientific, Голландия, и SANYO, Япония), ламинарные шкафы KOJAIR (Финляндия).
Для оценки достоверности получаемых результатов по профильным видам исследований лаборатория участвует в Федеральной Системе внешней оценки качества лабораторных исследований.

Гепатит С методом ПЦР

Доронин Иван Михайлович

HCV количественно ПЦР – это анализ, определяющий концентрацию враждебных организму частиц-носителей инфекционного заболевания гепатит С. Анализ основан на молекулярном методе полноразмерной цепной реакции, сокращённо ПЦР.

анализ на гепатит С (HCV)Подготовка к исследованию:

  • Забор биоматериала производится в утренее время, необходимое условие – натощак
  • Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи

Тип биоматериала: венозная кровь

Синонимы (rus): Определение РНК вируса гепатита С, количественный анализ на гепатит С, РНК вируса гепатита С количественный

Синонимы (eng): HCV RNA

Методы исследования: полимеразная цепная реакция

Единицы измерения: МЕ/мл

Сроки выполнения: 3-5 дней

Определение анализа на гепатит С

Анализ определяет количественную вирусную нагрузку в крови, количество единиц измерения вируса на определенное количество биоматериала. Анализ выявляет наличие возбудителя вируса гепатита C, сокращенно ВГС.

Определяется наличие генетического кода вируса (РНК) и его концентрацию. Положительный анализ показывает не только наличие заболевания (как это делает качественный анализ), но и размножение клеток вируса, и его динамику в процессе протекания болезни и ее лечения. Расшифровкой анализа занимаются профильные специалисты – врач-инфекционист или более узкая специализация – врач-гепатолог.

Противопоказанием к проведению анализа являются прием пищи не менее чем за 7-8 часов до забора биоматериала, загрязненный биоматериал, содержание гепарина в крови, наличие ингибиторов белкового или химического происхождения в биоматериале.

В каких случаях делают анализ на гепатит С?

Количественное исследование на гепатит C проводят для определения стратегии и программы лечения гепатита. На момент назначения анализа уже определено, что пациент болен гепатитом C, с помощью данного анализа выясняется, насколько велика вирусная нагрузка на организм. После получения результата врач-инфекционист определяет препараты для лечения и стратегию его проведения.

В процессе лечения вируса количественный анализ проводится для определения эффективности лечения и динамики изменения концентрации вируса в крови пациента.

Расшифровка результатов анализа

В советской и впоследствии в российской медицине принято было изменять вирусную нагрузку в количестве копий вируса на моль крови (копий/моль), в международной практике – международные единицы на миллилитр (МЕ/мл). Эти два стандарта сопоставимы, 1 МЕ/мл примерно равен 4 копии/мл. В крови либо не обнаруживается вирус (результат «не обнаружено»), либо количественное определение концентрации. Показатель менее 15 МЕ/мл сомнителен, находится ниже уровня чувствительности теста, рекомендовано повторить анализ. Результат 15 до 43 МЕ/мл должен быть описан врачами с учетом клинической картины исследуемого пациента. Однозначно достоверный положительный результат может объявляться при получении концентрации 43 до 6,90 Е7 МЕ/мл, означает заболевание человека гепатитов С и является показателем к интенсивному лечению.

Вирусы и вирусоподобные частицы (VLP)

Вирусоподобные частицы (VLP) предназначены для имитации представляющего интерес вируса, чтобы вызвать терапевтический эффект (например, иммунитет) без ущерба для вируса или риска заражения. Они были в центре внимания бесчисленных исследований инновационных вакцин. Размер VLP аналогичен размеру вирусов, который обычно составляет от нескольких десятков до нескольких сотен нанометров. В дополнение к многолазерной технологии NTA ViewSizer 3000, лазерный дифракционный анализатор размера частиц LA-960также хорошо подходит для анализа VLP. Лазерная дифракция — это комплексный метод, позволяющий проводить быстрый рутинный анализ. Этот метод также принципиально более чувствителен к более крупным частицам, таким как загрязняющие вещества. В зависимости от того, как производится VLP, фрагменты исходного материала, вероятно, будут присутствовать в образце в большем размере, чем сам VLP. Это происходит, когда материалы (например, эмульсии) готовятся с большим или широким распределением по размерам, а затем размер уменьшается для получения конечного продукта. Оставшиеся крупные частицы могут вызвать нежелательный иммунный ответ или проблемы с фильтрацией при последующей обработке (например, фильтрационной стерилизации). Для одинакового анализа вирусов и VLP важно, чтобы методика охватывала широкий диапазон динамических частиц.

Пример результата размера (ниже рис. 3) показывает три отдельные популяции. Самая мелкая (с наименьшим размером частиц) популяция — это сама VLP. Остальные популяции (с диаметром более 1 микрона) представляют собой исходный материал, который еще не подвергался резке или иным образом измельчению до более мелких размеров. LA-960 может сообщать метрики размера для всей популяции, а также показатели для каждой отдельной популяции, используя мультимодальный отчет.

Рисунок 3: Распределение частиц по размерам и результаты для материала VLP, измеренные прибором LA-960. В этом примере показаны три отдельные популяции. Самая мелкая (с наименьшим размером частиц) популяция — это сама VLP. Остальные популяции (с диаметром более 1 микрона) представляют собой исходный материал, который еще не подвергался резке или иным образом измельчению до более мелких размеров.

Преимущества неопределяемой низкой нагрузки

Низкая или неопределяемая вирусная нагрузка желательна по нескольким причинам.

  • Минимальный риск прогрессирования инфекции.
  • Минимальный риск развития резистентности к препаратам ВААРТ.
  • Минимальный риск передачи инфекции во время незащищенного полового контакта.
  • Максимальный шанс родить здорового ребенка (для женщин).

Таким образом, качество и продолжительность жизни ВИЧ-инфицированного пациента значительно повышаются. При этом он не представляет потенциальной угрозы для своих половых партнеров, ведь передача ВИЧ при нулевой нагрузке, а точнее при неопределенной, практически исключена. Да определенный риск сохраняется, но использование презервативов и его сводит к «0». Не говоря уже о том, что у человека появляется возможность иметь здоровых детей.

голоса
Рейтинг статьи
Ссылка на основную публикацию
ВсеИнструменты
Adblock
detector